要区分人或狗的DNA与猪DNA
，不可靠颜色、气息、肉眼形态或通俗显微镜直接判断。更可靠的做法是提取样本DNA
，再使用物种特异性PCR或实时荧光PCR检测人、狗、猪的特异性遗传片断；若是样原泉源重大或嫌疑混淆
，还可以对扩增片断测序。检测竣事后
，凭证各物种靶标是否泛起阳性信号
，判断样本属于人、狗、猪
，照旧含有多种DNA。

先确定要回覆的是“哪一种”照旧“是否混淆”

若是样本理论上只来自一个物种
，检测重点是判断人、狗、猪三个候选工具中的哪一个泛起阳性。若样原来自肉类、污渍、毛发、唾液或多个接触者
，可能同时含有差别泉源的DNA
，此时不可只做一个物种检测
，而应划分设置人源、犬源和猪源检测靶标。

常见的判断目的有两类：一是确认样本属于人、狗或猪中的某一种；二是判断样本中是否同时保存人和动物
，或同时保存两种以上动物DNA。第二种情形需要使用多重PCR、实时定量PCR或测序
，不可依据单个阳性效果直接下结论。

推荐的检测办法

第一步：规范收罗并提取DNA

收罗时应将差别样天职开处置惩罚
，并只管使用一次性手套、无DNA酶耗材和自力工具
，阻止人的皮肤细胞、口腔细胞或实验室残留污染样本。血液、肌肉、口腔拭子和带毛囊的毛发
，通常更容易获得可用于物种检测的DNA。

毛干自己往往缺少细胞核DNA
，只有毛根时才更适合举行人或狗的个体相关检测。经由高温、湿润、化学处置惩罚或长时间袒露的样本
，DNA可能已经降解。提取后通常要先测定DNA浓度和纯度
，并通过扩增内参判断样本是否保存抑制物。

第二步：划分设置人、狗、猪检测靶标

最适用的要领是设计三组具有物种区分能力的引物和探针
，划分检测人源、犬源和猪源DNA。实验中通；嵫≡裣吡Ｌ寤蚱
，例如细胞色素b或COI区域
，也可以使用具有物种差别的核基因片断。线粒体DNA拷贝数较多
，适合检测含量较低或已经部分降解的样本；核DNA则更适合在样实质量较好时举行进一步剖析。

若是接纳通俗PCR
，扩增竣事后可以通过凝胶电泳视察是否泛起对应巨细的条带。人源、犬源和猪源引物应爆发差别的特异性效果。若使用实时荧光PCR
，则凭证差别通道的荧光信号判断响应物种是否保存
，效果通常比纯粹视察条带更容易量化
，也更适合检测混淆样本。

• 人源靶标阳性：说明样本中检测到可扩增的人DNA。
• 犬源靶标阳性：说明样本中检测到可扩增的狗DNA。
• 猪源靶标阳性：说明样本中检测到可扩增的猪DNA。
• 多个靶标同时阳性：可能是混淆样本
  ，也可能保存交织污染
  ，需要连系阴性比照、重复实验和测序确认。

第三步：设置比照
，确认效果有用

物种判断不可只看待测样本的一个条带或一个荧光值。实验至少应包括已知人DNA、已知狗DNA、已知猪DNA作为阳性比照
，并设置无模板阴性比照。阳性比照用于确认试剂和引物能够正常事情
，阴性比照用于排查扩增系统被污染。

若是阴性比照也泛起扩增
，待测样本的阳性效果就不可直接采信
，应重新配制反应系统并替换污染耗材。若内参失败、DNA浓度过低或扩增受到抑制
，纵然三个物种靶标都没有信号
，也只能说明本次检测未获得有用效果
，不可等同于样本不含人、狗或猪DNA。

怎样凭证检测效果区分三种DNA

表格中的“阳性”只能说明检测到了响应物种的DNA片断
，不代表已经确定了某一小我私家的身份
，也不可单凭信号强弱判断样本中各物种的准确比例。若要判断是否为统一小我私家、统一条狗
，或举行个体泉源确认
，还需要使用响应的STR分型、犬科个体标记或其他个体遗传剖析。

通俗PCR不明确时
，用测序进一步确认

当样原泉源不明、DNA严重降解
，或者通俗PCR泛起多个条带时
，可以先扩增具有物种差别的线粒体条形码片断
，再对产品举行测序。将测得的序列与可靠的参考序枚举行比对
，可以确认它更靠近人、犬照旧猪的遗传序列。

关于含有多种泉源DNA的样本
，简单片断测序可能只读出含量较高的物种。此时可接纳克隆测序、混淆峰剖析或高通量测序
，识别样本中的多个物种因素。若只是想快速回覆“有没有猪DNA”
，物种特异性实时PCR通常已经足够；若需要同时筛查人、狗、猪及其他未知动物
，测序要领的笼罩规模更大。

差别样本适合的判断方法

• 血液、唾液或口腔拭子：通常先做DNA提取
  ，再举行人、狗、猪三组特异性PCR检测。
• 肉类或组织：优先使用线粒体靶标检测；若嫌疑多种肉源混淆
  ，可做多重PCR或测序。
• 带毛囊的毛发：可实验检测核DNA和线粒体DNA；只有毛干时
  ，物种判断仍可能可行
  ，但个体剖析能力较弱。
• 高温加工或严重糜烂样本：选择较短的扩增片断
  ，并增添重复检测
  ，阻止因DNA降解导致假阴性。
• 多个泉源接触过的外貌：应同时检测人源、犬源和猪源靶标
  ，并重点检查混淆信号和污染比照。

怎样获得更可信的最终结论

若是只是举行起源区分
，选择“DNA提。/狗/猪物种特异性实时PCR”即可。若效果泛起多个阳性、条带不切合预期
，或样本具有执法、食物质量或争议处置惩罚用途
，则应保存原始样本和实验纪录
，举行自力重复检测
，并用测序确认扩增片断的物种归属。

因此
，区分人或狗DNA与猪DNA的焦点不是视察样本外观
，而是划分检测三类物种特异性遗传标记：简单靶标阳性通常支持响应物种泉源
，多个靶标阳性提醒混淆或污染
，所有阴性则必需先扫除DNA降解、抑制和实验失败后才华诠释。